آٽولوگس نيوڪليس پلپوسس کي لمبر سبڪونڊرل هڏن ۾ امپلانٽ ڪيو ويو ته جيئن موڊڪ تبديلين جو هڪ جانورن جو ماڊل ٺاهيو وڃي.

Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان جي استعمال ڪيل برائوزر ورزن ۾ محدود CSS سپورٽ آهي. بهترين نتيجن لاءِ، اسان هڪ نئون برائوزر استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏيون ٿا (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي غير فعال ڪرڻ). انهي دوران، مسلسل سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ ڏيکارينداسين.
موڊڪ چينج (ايم سي) جي جانورن جي ماڊلز جي قيام ايم سي جي مطالعي لاءِ هڪ اهم بنياد آهي. نيوزي لينڊ جي چوويهه اڇي خرگوش کي شيم-آپريشن گروپ، عضلاتي امپلانٽيشن گروپ (ايم اي گروپ) ۽ نيوڪليس پلپوسس امپلانٽيشن گروپ (اين پي اي گروپ) ۾ ورهايو ويو. اين پي اي گروپ ۾، انٽرورٽيبرل ڊسڪ کي اينٽروليٽرل لمبر سرجيڪل اپروچ ذريعي ظاهر ڪيو ويو ۽ هڪ سوئي استعمال ڪئي وئي ته جيئن آخري پليٽ جي ويجهو L5 ورٽيبرل باڊي کي پنڪچر ڪري سگهجي. اين پي کي سرنج ذريعي L1/2 انٽرورٽيبرل ڊسڪ مان ڪڍيو ويو ۽ ان ۾ انجڪشن ڪيو ويو. سبڪونڊرل هڏن ۾ سوراخ ڪيو ويو. عضلاتي امپلانٽيشن گروپ ۽ شيم-آپريشن گروپ ۾ سرجري جا طريقا ۽ سوراخ ڪرڻ جا طريقا ساڳيا هئا جيئن اين پي امپلانٽيشن گروپ ۾. ايم اي گروپ ۾، عضلات جو هڪ ٽڪرو سوراخ ۾ رکيو ويو، جڏهن ته شيم-آپريشن گروپ ۾، سوراخ ۾ ڪجهه به نه رکيو ويو. آپريشن کان پوءِ، ايم آر آءِ اسڪيننگ ۽ ماليڪيولر بايولوجيڪل ٽيسٽنگ ڪئي وئي. اين پي اي گروپ ۾ سگنل تبديل ٿي ويو، پر شيم-آپريشن گروپ ۽ ايم اي گروپ ۾ ڪو به واضح سگنل تبديلي نه آيو. هسٽولوجيڪل مشاهدو ڏيکاريو ته امپلانٽيشن سائيٽ تي غير معمولي ٽشو جي واڌ ويجهه ڏٺي وئي، ۽ اين پي اي گروپ ۾ IL-4، IL-17 ۽ IFN-γ جو اظهار وڌي ويو. سبڪونڊرل هڏن ۾ اين پي جي امپلانٽيشن ايم سي جو هڪ جانورن جو ماڊل ٺاهي سگهي ٿو.
موڊيڪ تبديليون (MC) ورٽيبرل اينڊ پليٽس ۽ ويجھي هڏن جي ميرو جا زخم آهن جيڪي مقناطيسي گونج اميجنگ (MRI) تي نظر اچن ٿا. اهي لاڳاپيل علامتن سان ماڻهن ۾ ڪافي عام آهن. ڪيترن ئي مطالعي MC جي اهميت تي زور ڏنو آهي ڇاڪاڻ ته ان جو تعلق گهٽ پٺي جي درد (LBP) 2,3 سان آهي. ڊي روز ۽ ٻيا.4 ۽ موڊيڪ ۽ ٻيا.5 آزاد طور تي پهريون ڀيرو ورٽيبرل بون ميرو ۾ سبڪونڊرل سگنل جي غير معموليات جي ٽن مختلف قسمن کي بيان ڪيو. موڊيڪ قسم I تبديليون T1-وزن (T1W) تسلسل تي هائپوانٽينس ۽ T2-وزن (T2W) تسلسل تي هائپرانٽينس آهن. هي زخم هڏن جي ميرو ۾ فشر اينڊ پليٽس ۽ ويجھي ويسڪولر گرينوليشن ٽشو کي ظاهر ڪري ٿو. موڊيڪ قسم II تبديليون T1W ۽ T2W تسلسل ٻنهي تي اعلي سگنل ڏيکارين ٿيون. هن قسم جي زخم ۾، اينڊ پليٽ تباهي ڳولي سگهجي ٿي، انهي سان گڏ ويجھي هڏن جي ميرو جي هسٽولوجيڪل فيٽي متبادل. موڊيڪ قسم III تبديليون T1W ۽ T2W تسلسل ۾ گهٽ سگنل ڏيکارين ٿيون. اينڊ پليٽس سان لاڳاپيل اسڪليروٽڪ زخم ڏٺا ويا آهن6. ايم سي کي ريڙهه جي هڪ بيماري واري بيماري سمجهيو ويندو آهي ۽ ريڙهه جي ڪيترن ئي خراب ٿيندڙ بيمارين سان ويجهي سان لاڳاپيل آهي7,8,9.
دستياب ڊيٽا تي غور ڪندي، ڪيترن ئي مطالعي MC جي ايٽولوجي ۽ پيٿولوجيڪل ميڪانيزم ۾ تفصيلي بصيرت فراهم ڪئي آهي. البرٽ ۽ ٻين تجويز ڪيو ته MC ڊسڪ هرنيئيشن 8 جي ڪري ٿي سگهي ٿو. هو ۽ ٻين MC کي سخت ڊسڪ جي خراب ٿيڻ 10 جو سبب قرار ڏنو. ڪروڪ "اندروني ڊسڪ ڦاٽڻ" جو تصور پيش ڪيو، جنهن ۾ چيو ويو آهي ته بار بار ڊسڪ ٽراما اينڊ پليٽ ۾ مائڪرو ٽيئرز جو سبب بڻجي سگهي ٿو. ڦاٽ جي ٺهڻ کان پوءِ، نيوڪليس پلپوسس (NP) پاران اينڊ پليٽ جي تباهي هڪ آٽو ايميون ردعمل کي متحرڪ ڪري سگهي ٿي، جيڪو اڳتي هلي MC11 جي ترقي جو سبب بڻجي ٿو. ما ۽ ٻين هڪجهڙو نظريو شيئر ڪيو ۽ رپورٽ ڪيو ته NP-حوصلہ افزائي آٽو ايميونٽي MC12 جي پيٿوجينيسس ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿي.
مدافعتي نظام جا سيل، خاص طور تي CD4+ T مددگار لمفوسائٽس، آٽو ايميونٽي 13 جي پيٿوجينيسس ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا. تازو دريافت ٿيل Th17 سبسيٽ پروئنفلاميٽري سائيٽوڪائن IL-17 پيدا ڪري ٿو، ڪيموڪائن جي اظهار کي فروغ ڏئي ٿو، ۽ خراب ٿيل عضون ۾ ٽي سيلز کي IFN-γ14 پيدا ڪرڻ لاءِ متحرڪ ڪري ٿو. Th2 سيلز پڻ مدافعتي ردعمل جي پيٿوجينيسس ۾ هڪ منفرد ڪردار ادا ڪن ٿا. IL-4 جو نمائندو Th2 سيل جي طور تي اظهار سخت امونوپيٿولوجيڪل نتيجا 15 جو سبب بڻجي سگهي ٿو.
جيتوڻيڪ MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 تي ڪيترائي ڪلينڪل اڀياس ڪيا ويا آهن، پر اڃا تائين مناسب جانورن جي تجرباتي ماڊلز جي کوٽ آهي جيڪي MC عمل جي نقل ڪري سگهن ٿا جيڪو اڪثر انسانن ۾ ٿيندو آهي ۽ ايٽولوجي يا نئين علاج جهڙوڪ ٽارگيٽ ٿيل علاج جي جاچ لاءِ استعمال ڪري سگهجن ٿا. اڄ تائين، MC جا صرف چند جانورن جا ماڊل بنيادي پيٿولوجيڪل ميڪانيزم جو مطالعو ڪرڻ لاءِ رپورٽ ڪيا ويا آهن.
البرٽ ۽ ما پاران تجويز ڪيل آٽو ايميون نظريي جي بنياد تي، هن مطالعي ۾ سوراخ ٿيل ورٽيبرل اينڊ پليٽ جي ويجهو اين پي کي آٽو ٽرانسپلانٽ ڪندي هڪ سادو ۽ ٻيهر پيدا ٿيندڙ خرگوش ايم سي ماڊل قائم ڪيو ويو. ٻيا مقصد جانورن جي ماڊلز جي هسٽولوجيڪل خاصيتن جو مشاهدو ڪرڻ ۽ ايم سي جي ترقي ۾ اين پي جي مخصوص ميڪانيزم جو جائزو وٺڻ آهن. هن مقصد لاءِ، اسان ايم سي جي ترقي جو مطالعو ڪرڻ لاءِ ماليڪيولر بائيولاجي، ايم آر آءِ، ۽ هسٽولوجيڪل مطالعي جهڙيون ٽيڪنڪ استعمال ڪندا آهيون.
ٻه خرگوش سرجري دوران رت وهڻ سبب فوت ٿي ويا، ۽ چار خرگوش ايم آر آءِ دوران بي هوشي جي ڪري فوت ٿي ويا. باقي 48 خرگوش بچي ويا ۽ سرجري کان پوءِ ڪو به رويي يا اعصابي نشان نه ڏيکاريا.
ايم آر آءِ ڏيکاري ٿو ته مختلف سوراخن ۾ شامل ٿيل ٽشو جي سگنل جي شدت مختلف آهي. اين پي اي گروپ ۾ L5 ورٽيبرل باڊي جي سگنل جي شدت بتدريج داخل ٿيڻ کان 12، 16 ۽ 20 هفتن ۾ تبديل ٿي وئي (T1W تسلسل گهٽ سگنل ڏيکاريو، ۽ T2W تسلسل مخلوط سگنل ۽ گهٽ سگنل ڏيکاريو) (شڪل 1C)، جڏهن ته ايم بيڊ ٿيل حصن جي ٻين ٻن گروپن جي ايم آر آءِ ظاهر ساڳئي عرصي دوران نسبتا مستحڪم رهي (شڪل 1A، B).
(الف) خرگوش جي لمبر اسپائن جي نمائندگي ڪندڙ ترتيب وار ايم آر آءِ 3 وقت جي پوائنٽن تي. شيم-آپريشن گروپ جي تصويرن ۾ ڪو به سگنل غير معمولي نه مليو. (ب) ايم اي گروپ ۾ ورٽيبرل باڊي جون سگنل خاصيتون شيم-آپريشن گروپ ۾ ملندڙ جلندڙ آهن، ۽ وقت سان گڏ ايمبيڊنگ سائيٽ تي ڪا به اهم سگنل تبديلي نه ڏٺي وئي آهي. (ج) اين پي اي گروپ ۾، گهٽ سگنل T1W تسلسل ۾ واضح طور تي نظر اچي ٿو، ۽ مخلوط سگنل ۽ گهٽ سگنل T2W تسلسل ۾ واضح طور تي نظر اچن ٿا. 12-هفتي جي عرصي کان 20-هفتي جي عرصي تائين، T2W تسلسل ۾ گهٽ سگنلن جي چوڌاري اسپوراڊڪ هاءِ سگنل گهٽجي ويندا آهن.
اين پي اي گروپ ۾ ورٽيبرل باڊي جي امپلانٽيشن سائيٽ تي واضح هڏن جي هائپرپلاسيا ڏسي سگهجي ٿي، ۽ هڏن جي هائپرپلاسيا اين پي اي گروپ جي مقابلي ۾ 12 کان 20 هفتن تائين تيزيءَ سان ٿيندي آهي (شڪل 2 سي)، ماڊل ٿيل ورٽيبرل باڊيز ۾ ڪا خاص تبديلي نظر نه آئي آهي؛ شام گروپ ۽ ايم اي گروپ (شڪل 2 سي) 2 اي، بي).
(الف) امپلانٽ ٿيل حصي تي ڪرنگهي جي جسم جي مٿاڇري تمام هموار آهي، سوراخ چڱي طرح شفا ڏيندو آهي، ۽ ڪرنگهي جي جسم ۾ ڪو به هائپرپلاسيا ناهي. (ب) ايم اي گروپ ۾ امپلانٽ ٿيل سائيٽ جي شڪل شيم آپريشن گروپ وانگر آهي، ۽ وقت سان گڏ امپلانٽ ٿيل سائيٽ جي ظاهر ۾ ڪا به واضح تبديلي ناهي. (ج) اين پي اي گروپ ۾ امپلانٽ ٿيل سائيٽ تي هڏن جو هائپرپلاسيا ٿيو. هڏن جو هائپرپلاسيا تيزي سان وڌيو ۽ انٽرورٽيبرل ڊسڪ ذريعي ڪنٽرا ليٽرل ورٽيبرل باڊي تائين به وڌايو ويو.
هسٽولوجيڪل تجزيو هڏن جي ٺهڻ بابت وڌيڪ تفصيلي معلومات فراهم ڪري ٿو. شڪل 3 ۾ H&E سان داغدار پوسٽ آپريٽو حصن جون تصويرون ڏيکاريون ويون آهن. شيم-آپريشن گروپ ۾، ڪانڊروسائٽس چڱي طرح ترتيب ڏنل هئا ۽ ڪو به سيل پروليفريشن نه مليو (شڪل 3A). ME گروپ ۾ صورتحال شيم-آپريشن گروپ (شڪل 3B) جهڙي هئي. جڏهن ته، NPE گروپ ۾، امپلانٽيشن سائيٽ تي ڪانڊروسائٽس جي هڪ وڏي تعداد ۽ NP-جهڙن سيلز جي پروليفيشن ڏٺي وئي (شڪل 3C)؛
(الف) ٽرابيڪيولا کي آخري پليٽ جي ويجهو ڏسي سگهجي ٿو، ڪنڊروسائٽس صاف طور تي هڪجهڙا سيل سائيز ۽ شڪل سان ترتيب ڏنل آهن ۽ ڪو به واڌارو نه آهي (40 ڀيرا). (ب) ايم اي گروپ ۾ امپلانٽيشن سائيٽ جي حالت شيم گروپ وانگر آهي. ٽرابيڪيولا ۽ ڪنڊروسائٽس ڏسي سگهجن ٿا، پر امپلانٽيشن سائيٽ تي ڪو به واضح واڌارو نه آهي (40 ڀيرا). (ب) اهو ڏسي سگهجي ٿو ته ڪنڊروسائٽس ۽ اين پي جهڙا سيلز خاص طور تي وڌندا آهن، ۽ ڪنڊروسائٽس جي شڪل ۽ سائيز غير مساوي آهن (40 ڀيرا).
اين پي اي ۽ ايم اي گروپن ۾ انٽرليوڪن 4 (IL-4) ايم آر اين اي، انٽرليوڪن 17 (IL-17) ايم آر اين اي، ۽ انٽرفيرون γ (IFN-γ) ايم آر اين اي جو اظهار ڏٺو ويو. جڏهن ٽارگيٽ جينز جي اظهار جي سطحن جو مقابلو ڪيو ويو، ته اين پي اي گروپ ۾ IL-4، IL-17، ۽ IFN-γ جي جين اظهارن ۾ ME گروپ ۽ شيم آپريشن گروپ (شڪل 4) (P < 0.05) جي مقابلي ۾ خاص طور تي اضافو ٿيو. شيم آپريشن گروپ جي مقابلي ۾، ME گروپ ۾ IL-4، IL-17، ۽ IFN-γ جي اظهار جي سطح صرف ٿوري وڌي وئي ۽ شمارياتي تبديلي (P > 0.05) تائين نه پهتي.
اين پي اي گروپ ۾ IL-4، IL-17 ۽ IFN-γ جي mRNA اظهار شيم آپريشن گروپ ۽ ME گروپ (P < 0.05) جي ڀيٽ ۾ هڪ خاص طور تي وڌيڪ رجحان ڏيکاريو.
ان جي ابتڙ، ايم اي گروپ ۾ اظهار جي سطحن ۾ ڪو خاص فرق نه ڏيکاريو ويو (P> 0.05).
تبديل ٿيل mRNA اظهار جي نموني جي تصديق ڪرڻ لاءِ IL-4 ۽ IL-17 جي خلاف تجارتي طور تي دستياب اينٽي باڊيز استعمال ڪندي ويسٽرن بلٽ تجزيو ڪيو ويو. جيئن شڪل 5A، B ۾ ڏيکاريل آهي، ME گروپ ۽ شيم آپريشن گروپ جي مقابلي ۾، NPE گروپ ۾ IL-4 ۽ IL-17 جي پروٽين جي سطح ۾ خاص طور تي اضافو ٿيو (P < 0.05). شيم آپريشن گروپ جي مقابلي ۾، ME گروپ ۾ IL-4 ۽ IL-17 جي پروٽين جي سطح پڻ شمارياتي طور تي اهم تبديلين تائين پهچڻ ۾ ناڪام ٿي (P> 0.05).
(الف) اين پي اي گروپ ۾ IL-4 ۽ IL-17 جي پروٽين جي سطح ايم اي گروپ ۽ پليسبو گروپ (P < 0.05) جي ڀيٽ ۾ تمام گهڻي هئي. (ب) ويسٽرن بلاٽ هسٽوگرام.
سرجري دوران حاصل ڪيل انساني نمونن جي محدود تعداد جي ڪري، MC جي پيٿوجينيسس تي واضح ۽ تفصيلي مطالعي ڪجهه ڏکيو آهي. اسان MC جي هڪ جانورن جي ماڊل کي قائم ڪرڻ جي ڪوشش ڪئي ته جيئن ان جي امڪاني پيٿولوجيڪل ميڪانيزم جو مطالعو ڪري سگهجي. ساڳئي وقت، NP آٽوگرافٽ پاران پيدا ٿيندڙ MC جي ڪورس جي پيروي ڪرڻ لاءِ ريڊيالوجيڪل تشخيص، هسٽولوجيڪل تشخيص ۽ ماليڪيولر حياتياتي تشخيص استعمال ڪئي وئي. نتيجي طور، NP امپلانٽيشن ماڊل جي نتيجي ۾ سگنل جي شدت ۾ 12-هفتن کان 20-هفتن جي وقت جي پوائنٽن تائين بتدريج تبديلي آئي (T1W تسلسل ۾ مخلوط گهٽ سگنل ۽ T2W تسلسل ۾ گهٽ سگنل)، ٽشو تبديلين جي نشاندهي ڪندي، ۽ هسٽولوجيڪل ۽ ماليڪيولر حياتياتي تشخيص ريڊيالوجيڪل مطالعي جي نتيجن جي تصديق ڪئي.
هن تجربي جا نتيجا ڏيکارين ٿا ته NPE گروپ ۾ vertebral body جي خلاف ورزي جي جاءِ تي بصري ۽ هسٽولوجيڪل تبديليون آيون. ساڳئي وقت، IL-4، IL-17 ۽ IFN-γ جينز جو اظهار، گڏوگڏ IL-4، IL-17 ۽ IFN-γ جو اظهار ڏٺو ويو، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته vertebral body ۾ autologous nucleus pulposus tissue جي خلاف ورزي سگنل ۽ مورفولوجيڪل تبديلين جو هڪ سلسلو پيدا ڪري سگهي ٿي. اهو ڳولڻ آسان آهي ته جانورن جي ماڊل جي vertebral body جي سگنل خاصيتون (T1W sequence ۾ گهٽ سگنل، مخلوط سگنل ۽ T2W sequence ۾ گهٽ سگنل) انساني vertebral cells جي سگنل خاصيتون سان تمام گهڻيون ملندڙ جلندڙ آهن، ۽ MRI خاصيتون پڻ histology ۽ gross anatomy جي مشاهدن جي تصديق ڪن ٿيون، يعني، vertebral body cells ۾ تبديليون ترقي پسند آهن. جيتوڻيڪ تيز صدمي جي ڪري سوزش واري ردعمل پنڪچر کان جلد ئي ظاهر ٿي سگهي ٿي، MRI نتيجن مان ظاهر ٿيو ته بتدريج وڌندڙ سگنل تبديليون پنڪچر کان 12 هفتا پوءِ ظاهر ٿيون ۽ MRI تبديلين جي بحالي يا الٽ جي ڪنهن به نشاني کان سواءِ 20 هفتن تائين جاري رهيون. اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته آٽولوگس ورٽيبرل اين پي خرگوش ۾ ترقي پسند ايم وي قائم ڪرڻ لاءِ هڪ قابل اعتماد طريقو آهي.
هن پنڪچر ماڊل کي مناسب مهارت، وقت ۽ جراحي ڪوشش جي ضرورت آهي. ابتدائي تجربن ۾، پيراورٽيبرل لئگامينٽس ڍانچي جي ڪٽڻ يا گهڻي محرڪ جي نتيجي ۾ ورٽيبرل آسٽيوفائٽس جي ٺهڻ جو سبب بڻجي سگهي ٿو. احتياط ڪرڻ گهرجي ته ڀرپاسي جي ڊسڪ کي نقصان نه پهچايو وڃي يا ان ۾ جلن نه ٿئي. جيئن ته مسلسل ۽ ٻيهر پيدا ٿيندڙ نتيجا حاصل ڪرڻ لاءِ دخول جي کوٽائي کي ڪنٽرول ڪيو وڃي، اسان دستي طور تي 3 ملي ميٽر ڊگهي سوئي جي شيٿ کي ڪٽي هڪ پلگ ٺاهيو. هن پلگ کي استعمال ڪندي ورٽيبرل جسم ۾ هڪجهڙائي ڊرلنگ جي کوٽائي کي يقيني بڻائي ٿو. ابتدائي تجربن ۾، آپريشن ۾ شامل ٽن آرٿوپيڊڪ سرجنن 18-گيج سوئي يا ٻين طريقن جي ڀيٽ ۾ 16-گيج سوئي سان ڪم ڪرڻ آسان ڏٺو. ڊرلنگ دوران گهڻي رت وهڻ کان بچڻ لاءِ، سوئي کي ڪجهه دير تائين اڃا تائين رکڻ سان هڪ وڌيڪ مناسب داخل ڪرڻ وارو سوراخ فراهم ٿيندو، اهو مشورو ڏئي ٿو ته MC جي هڪ خاص درجي کي هن طريقي سان ڪنٽرول ڪري سگهجي ٿو.
جيتوڻيڪ ڪيترن ئي مطالعي MC کي نشانو بڻايو آهي، MC25,26,27 جي ايٽولوجي ۽ پيٿوجينيسس بابت ٿورو ئي ڄاڻ آهي. اسان جي پوئين مطالعي جي بنياد تي، اسان ڏٺو ته خودڪار قوت مدافعت MC12 جي موجودگي ۽ ترقي ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿي. هن مطالعي ۾ IL-4، IL-17، ۽ IFN-γ جي مقداري اظهار جو جائزو ورتو ويو، جيڪي اينٽيجن محرک کان پوءِ CD4+ سيلز جا مکيه فرق جا رستا آهن. اسان جي مطالعي ۾، منفي گروپ جي مقابلي ۾، NPE گروپ ۾ IL-4، IL-17، ۽ IFN-γ جو اظهار وڌيڪ هو، ۽ IL-4 ۽ IL-17 جي پروٽين جي سطح پڻ وڌيڪ هئي.
ڪلينڪ طور تي، ڊسڪ هرنيائيشن 28 سان مريضن جي NP سيلز ۾ IL-17 mRNA اظهار وڌي ويو آهي. صحتمند ڪنٽرول 29 جي مقابلي ۾ هڪ تيز غير-ڪمپريسيو ڊسڪ هرنيائيشن ماڊل ۾ IL-4 ۽ IFN-γ اظهار جي سطح ۾ اضافو پڻ مليو. IL-17 آٽو ايميون بيمارين ۾ سوزش، ٽشو جي زخم ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو 30 ۽ IFN-γ31 جي مدافعتي ردعمل کي وڌائي ٿو. MRL/lpr چوٿون 32 ۽ آٽو ايميونٽي-حساس چوٿون 33 ۾ IL-17-ثالثي ٽشو جي زخم ۾ واڌارو رپورٽ ڪيو ويو آهي. IL-4 پروئنفلاميٽري سائيٽوڪائنز (جهڙوڪ IL-1β ۽ TNFα) ۽ ميڪروفيج ايڪٽيويشن 34 جي اظهار کي روڪي سگھي ٿو. اهو ٻڌايو ويو ته IL-4 جو mRNA اظهار NPE گروپ ۾ IL-17 ۽ IFN-γ جي مقابلي ۾ ساڳئي وقت مختلف هو؛ NPE گروپ ۾ IFN-γ جو mRNA اظهار ٻين گروپن جي ڀيٽ ۾ خاص طور تي وڌيڪ هو. تنهن ڪري، IFN-γ جي پيداوار NP انٽرڪاليشن جي ڪري پيدا ٿيندڙ سوزش واري ردعمل جو ثالث ٿي سگهي ٿي. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته IFN-γ ڪيترن ئي سيل قسمن پاران پيدا ٿئي ٿو، جن ۾ چالو ٿيل قسم 1 مددگار ٽي سيلز، قدرتي قاتل سيلز، ۽ ميڪروفيجز 35,36 شامل آهن، ۽ هڪ اهم پرو-انفلاميٽري سائيٽوڪائن آهي جيڪو مدافعتي ردعمل کي فروغ ڏئي ٿو 37.
هي مطالعو اهو ظاهر ڪري ٿو ته ايم سي جي موجودگي ۽ ترقي ۾ آٽو ايميون ردعمل شامل ٿي سگهي ٿو. لووما ۽ ٻين اهو معلوم ڪيو ته ايم سي ۽ نمايان اين پي جون سگنل خاصيتون ايم آر آءِ تي هڪجهڙيون آهن، ۽ ٻئي T2W تسلسل ۾ اعليٰ سگنل ڏيکارين ٿا 38. ​​ڪجهه سائيٽوڪائنز جي تصديق ڪئي وئي آهي ته اهي ايم سي جي موجودگي سان ويجهي سان لاڳاپيل آهن، جهڙوڪ IL-139. ما ۽ ٻين اهو تجويز ڪيو ته اين پي جو مٿي يا هيٺئين طرف وڌڻ MC12 جي موجودگي ۽ ترقي تي وڏو اثر وجهي سگهي ٿو. بوبيچڪو 40 ۽ هرزبين ۽ ٻين ٻڌايو ته اين پي هڪ مدافعتي ٽشو آهي جيڪو پيدائش کان وٺي ويسڪولر گردش ۾ داخل نه ٿي سگهي ٿو. اين پي پروٽروشن غير ملڪي جسمن کي رت جي فراهمي ۾ متعارف ڪرائيندا آهن، ان ڪري مقامي آٽو ايميون رد عملن جي وچ ۾ 42. آٽو ايميون رد عمل وڏي تعداد ۾ مدافعتي عنصرن کي جنم ڏئي سگهن ٿا، ۽ جڏهن اهي عنصر مسلسل ٽشوز جي سامهون ايندا آهن، ته اهي سگنلنگ ۾ تبديليون آڻي سگهن ٿا 43. هن مطالعي ۾، IL-4، IL-17 ۽ IFN-γ جو اوور ايڪسپريشن عام مدافعتي عنصر آهن، جيڪي NP ۽ MCs44 جي وچ ۾ ويجهي تعلق کي وڌيڪ ثابت ڪن ٿا. هي جانورن جو ماڊل اين پي بريڪ تھرو ۽ اينڊ پليٽ ۾ داخلا جي چڱي طرح نقل ڪري ٿو. هن عمل ايم سي تي آٽو ايميونٽي جو اثر وڌيڪ ظاهر ڪيو.
جيئن توقع ڪئي وئي، هي جانورن جو ماڊل اسان کي MC جي مطالعي لاءِ هڪ ممڪن پليٽ فارم فراهم ڪري ٿو. بهرحال، هن ماڊل ۾ اڃا تائين ڪجهه حدون آهن: پهرين، جانورن جي مشاهدي جي مرحلي دوران، ڪجهه وچولي مرحلي جي خرگوش کي هسٽولوجيڪل ۽ ماليڪيولر بائيولاجي ٽيسٽنگ لاءِ euthanized ڪرڻ جي ضرورت آهي، تنهن ڪري ڪجهه جانور وقت سان گڏ "استعمال کان ٻاهر ٿي ويندا آهن". ٻيو، جيتوڻيڪ هن مطالعي ۾ ٽي وقت پوائنٽ مقرر ڪيا ويا آهن، بدقسمتي سان، اسان صرف هڪ قسم جي MC (موڊڪ قسم I تبديلي) کي ماڊل ڪيو، تنهنڪري اهو انساني بيماري جي ترقي جي عمل جي نمائندگي ڪرڻ لاءِ ڪافي ناهي، ۽ سڀني سگنل تبديلين کي بهتر طور تي ڏسڻ لاءِ وڌيڪ وقت پوائنٽ مقرر ڪرڻ جي ضرورت آهي. ٽيون، ٽشو جي جوڙجڪ ۾ تبديليون حقيقت ۾ هسٽولوجيڪل اسٽيننگ ذريعي واضح طور تي ڏيکاري سگهجن ٿيون، پر ڪجهه خاص ٽيڪنڪ هن ماڊل ۾ مائڪرو اسٽرڪچرل تبديلين کي بهتر طور تي ظاهر ڪري سگهن ٿيون. مثال طور، خرگوش انٽرورٽيبرل ڊسڪ ۾ فائبرو ڪارٽيلج جي ٺهڻ جو تجزيو ڪرڻ لاءِ پولرائزڊ لائيٽ مائڪروسڪوپي استعمال ڪئي وئي هئي 45. MC ۽ اينڊ پليٽ تي NP جي ڊگهي مدت جي اثرات کي وڌيڪ مطالعي جي ضرورت آهي.
نيوزي لينڊ جا چوويهه نر اڇا خرگوش (وزن لڳ ڀڳ 2.5-3 ڪلوگرام، عمر 3-3.5 مهينا) بي ترتيب طور تي شيم آپريشن گروپ، عضلاتي امپلانٽيشن گروپ (ايم اي گروپ) ۽ اعصاب جي جڙ امپلانٽيشن گروپ (اين پي اي گروپ) ۾ ورهايل هئا. سڀني تجرباتي طريقيڪار کي تيانجن اسپتال جي اخلاقي ڪميٽي پاران منظور ڪيو ويو، ۽ تجرباتي طريقا منظور ٿيل هدايتن جي سخت مطابق ڪيا ويا.
ايس. سوبجيما 46 جي سرجري ٽيڪنڪ ۾ ڪجهه بهتري ڪئي وئي آهي. هر خرگوش کي هڪ پاسي واري آرام واري پوزيشن ۾ رکيو ويو ۽ پوئين پاسي واري ريٽروپيريٽونيل اپروچ استعمال ڪندي پنج لڳاتار لمبر انٽرورٽيبرل ڊسڪ (IVDs) جي اڳئين سطح کي بي نقاب ڪيو ويو. هر خرگوش کي جنرل اينسٿيسيا ڏني وئي (20٪ يوريٿين، ڪن جي رڳ ذريعي 5 ملي ليٽر/ڪلوگرام). پسلي جي هيٺين ڪنڊ کان پيلوڪ برم تائين هڪ ڊگهو چمڙي جو چيرا ٺاهيو ويو، پيراورٽيبرل عضلات تائين 2 سينٽي ميٽر وينٽرل. L1 کان L6 تائين ساڄي اينٽروليٽرل اسپائن کي اوورلينگ سبڪيوٽنيئس ٽشو، ريٽروپيريٽونيل ٽشو، ۽ عضلات جي تيز ۽ ڪُند ڪٽڻ سان ظاهر ڪيو ويو (شڪل 6A). ڊسڪ جي سطح کي پيلوڪ برم استعمال ڪندي L5-L6 ڊسڪ ليول لاءِ هڪ جسماني نشان جي طور تي طئي ڪيو ويو. L5 ورٽيبرا جي آخري پليٽ جي ويجهو 3 ملي ميٽر جي کوٽائي تائين سوراخ ڪرڻ لاءِ 16-گيج پنڪچر سوئي استعمال ڪريو (شڪل 6B). L1-L2 انٽرورٽيبرل ڊسڪ ۾ آٽولوگس نيوڪليس پلپوسس کي ايسپيريٽ ڪرڻ لاءِ 5-ml سرنج استعمال ڪريو (شڪل 6C). هر گروپ جي گهرجن مطابق نيوڪليس پلپوسس يا عضلات کي هٽايو. ڊرل سوراخ کي ڳرو ڪرڻ کان پوءِ، جذب ٿيندڙ سيون گہرے فاشيا، سطحي فاشيا ۽ چمڙي تي رکيا ويندا آهن، سرجري دوران ورٽيبرل جسم جي پيريوسٽيل ٽشو کي نقصان نه پهچڻ جو خيال رکيو ويندو آهي.
(الف) L5–L6 ڊسڪ کي پوسٽروليٽرل ريٽروپيريٽونيل اپروچ ذريعي ظاهر ڪيو ويندو آهي. (ب) L5 اينڊ پليٽ جي ويجهو هڪ سوراخ ڪرڻ لاءِ 16-گيج سوئي استعمال ڪريو. (ج) آٽولوگس ايم ايف کي ڪٽايو ويندو آهي.
ڪن جي رڳ ذريعي 20٪ يوريٿين (5 ملي ليٽر/ڪلوگرام) سان جنرل اينسٿيسيا ڏني وئي، ۽ آپريشن کان پوءِ 12، 16 ۽ 20 هفتن ۾ لمبر اسپائن ريڊيوگراف ورجايا ويا.
سرجري کان 12، 16 ۽ 20 هفتن بعد ڪيٽامائن (25.0 ملي گرام/ڪلوگرام) ۽ نس ۾ سوڊيم پينٽوباربيٽل (1.2 گرام/ڪلوگرام) جي اندروني انجڪشن ذريعي خرگوش جي قرباني ڏني وئي. هسٽولوجيڪل تجزيو لاءِ پوري اسپائن کي هٽايو ويو ۽ حقيقي تجزيو ڪيو ويو. مدافعتي عنصرن ۾ تبديلين کي ڳولڻ لاءِ مقداري ريورس ٽرانسڪرپشن (RT-qPCR) ۽ ويسٽرن بلوٽنگ استعمال ڪئي وئي.
خرگوش ۾ ايم آر آءِ جا امتحان 3.0 ٽي ڪلينڪل مقناطيس (GE ميڊيڪل سسٽم، فلورنس، ايس سي) استعمال ڪندي ڪيا ويا جيڪي آرٿوگونل لِم ڪوئل رسيور سان ليس هئا. خرگوش کي ڪن جي رڳ ذريعي 20٪ يوريٿين (5 ايم ايل/ڪلوگرام) سان بي هوشي ڪئي وئي ۽ پوءِ مقناطيس جي اندر سُوپائن رکيو ويو جنهن ۾ لمبر علائقي کي 5 انچ قطر جي گول مٿاڇري واري ڪوئل (GE ميڊيڪل سسٽم) تي مرڪز بڻايو ويو. ڪورونل T2-وزن وارا لوڪلائيزر تصويرون (TR، 1445 ايم ايس؛ TE، 37 ايم ايس) حاصل ڪيون ويون ته جيئن لمبر ڊسڪ جي جڳهه کي L3-L4 کان L5-L6 تائين بيان ڪري سگهجي. سيگيٽل جهاز T2-وزن وارا سلائسون هيٺ ڏنل سيٽنگن سان حاصل ڪيون ويون: تيز اسپن-ايڪو تسلسل 2200 ايم ايس جي ورجائي وقت (TR) ۽ 70 ايم ايس جي گونج وقت (TE) سان، ميٽرڪس؛ 260 ۽ اٺ محرکن جو بصري ميدان؛ ڪٽڻ جي ٿولهه 2 ملي ميٽر هئي، فرق 0.2 ملي ميٽر هو.
آخري تصوير ڪڍڻ ۽ آخري خرگوش کي مارڻ کان پوءِ، شيم، عضلات سان جڙيل، ۽ اين پي ڊسڪ کي هسٽولوجيڪل امتحان لاءِ هٽايو ويو. ٽشوز کي 10٪ غير جانبدار بفر ٿيل فارملين ۾ 1 هفتي لاءِ مقرر ڪيو ويو، ايٿيلينڊياميني ٽيٽراسيٽڪ ايسڊ سان ڊيڪلسيف ڪيو ويو، ۽ پيرافين کي سيڪشن ڪيو ويو. ٽشو بلاڪز کي پيرافين ۾ شامل ڪيو ويو ۽ مائڪروٽوم استعمال ڪندي ساگيٽل حصن (5 μm ٿلهي) ۾ ڪٽيو ويو. حصن کي هيماتوڪسيلين ۽ ايوسين (H&E) سان رنگ ڪيو ويو.
هر گروپ ۾ خرگوش مان انٽرورٽيبرل ڊسڪ گڏ ڪرڻ کان پوءِ، ٺاهيندڙ جي هدايتن ۽ هڪ ImProm II ريورس ٽرانسڪرپشن سسٽم (پروميگا انڪارپوريٽڊ، ميڊيسن، WI، USA) جي مطابق UNIQ-10 ڪالم (شنگھائي سانگن بايو ٽيڪنالاجي ڪمپني، لميٽيڊ، چين) استعمال ڪندي ڪل آر اين اي ڪڍيو ويو. ريورس ٽرانسڪرپشن ڪئي وئي.
RT-qPCR ٺاهيندڙ جي هدايتن مطابق پرزم 7300 (اپلائيڊ بايو سسٽم انڪارپوريشن، آمريڪا) ۽ SYBR گرين جمپ اسٽارٽ ٽاڪ ريڊي ميڪس (سگما-الڊرچ، سينٽ لوئس، MO، آمريڪا) استعمال ڪندي ڪيو ويو. پي سي آر جي رد عمل جو مقدار 20 μl هو ۽ ان ۾ 1.5 μl diluted cDNA ۽ هر پرائمر جو 0.2 μM شامل هو. پرائمر OligoPerfect Designer (Invitrogen، Valencia، CA) پاران ڊزائين ڪيا ويا ۽ Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Table 1) پاران تيار ڪيا ويا. هيٺ ڏنل حرارتي سائيڪلنگ حالتون استعمال ڪيون ويون: شروعاتي پوليمريز ايڪٽيويشن قدم 94°C تي 2 منٽن لاءِ، پوءِ ٽيمپليٽ ڊينيچريشن لاءِ 94°C تي هر هڪ 15 سيڪنڊن جا 40 چڪر، 60°C تي 1 منٽ لاءِ اينيلنگ، ايڪسٽينشن، ۽ فلوروسينس. ماپون 72°C تي 1 منٽ لاءِ ڪيون ويون. سڀني نمونن کي ٽي ڀيرا وڌايو ويو ۽ سراسري قدر RT-qPCR تجزيو لاءِ استعمال ڪيو ويو. FlexStation 3 (ماليڪيولر ڊيوائسز، سني ويل، CA، USA) استعمال ڪندي امپليفڪيشن ڊيٽا جو تجزيو ڪيو ويو. IL-4، IL-17، ۽ IFN-γ جين ايڪسپريشن کي اينڊوجينس ڪنٽرول (ACTB) ۾ نارمل ڪيو ويو. ٽارگيٽ mRNA جي نسبتي ايڪسپريشن ليولز کي 2-ΔΔCT طريقو استعمال ڪندي ڳڻيو ويو.
RIPA ليسس بفر (جنهن ۾ پروٽيز ۽ فاسفيٽيس انبيٽر ڪاڪٽيل شامل آهي) ۾ ٽشو هوموجنائيزر استعمال ڪندي ٽشوز مان ڪل پروٽين ڪڍيو ويو ۽ پوءِ ٽشو ملبہ هٽائڻ لاءِ 4°C تي 20 منٽن لاءِ 13,000 rpm تي سينٽرفيوج ڪيو ويو. پروٽين جا پنجاهه مائڪروگرام في لين لوڊ ڪيا ويا، 10% SDS-PAGE سان الڳ ڪيا ويا، ۽ پوءِ PVDF جھلي ڏانهن منتقل ڪيا ويا. ڪمري جي حرارت تي 1 ڪلاڪ لاءِ 0.1% ٽوئن 20 تي مشتمل ٽريس-بفر ٿيل سالين (TBS) ۾ 5% نان فيٽ خشڪ کير ۾ بلاڪنگ ڪئي وئي. جھلي کي خرگوش اينٽي ڊيڪورين پرائمري اينٽي باڊي (1:200 کي گهٽايو ويو؛ بوسٽر، ووهان، چين) (1:200 کي گهٽايو ويو؛ بايوس، بيجنگ، چين) سان رات جو 4°C تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو ۽ ٻئي ڏينهن تي رد عمل ظاهر ڪيو ويو؛ ڪمري جي حرارت تي 1 ڪلاڪ لاءِ هارسريڊش پيرو آڪسيڊيس (بوسٽر، ووهان، چين) سان گڏ ثانوي اينٽي باڊي (1:40,000 ڊائليشن تي بکري اينٽي خرگوش اميونوگلوبلين جي) سان گڏ. ايڪس ري شعاع کان پوءِ ڪيميلومائنسينٽ جھلي تي وڌندڙ ڪيميلومائنسينس ذريعي مغربي بلٽ سگنل ڳوليا ويا. ڊينسيٽوميٽرڪ تجزيو لاءِ، بلٽس کي اسڪين ڪيو ويو ۽ بينڊ اسڪين سافٽ ويئر استعمال ڪندي مقدار مقرر ڪئي وئي ۽ نتيجن کي ٽارگيٽ جين اميونوري ايڪٽيويٽي ۽ ٽيوبلين اميونوري ايڪٽيويٽي جي تناسب جي طور تي ظاهر ڪيو ويو.
شمارياتي حساب ڪتاب SPSS16.0 سافٽ ويئر پيڪيج (SPSS، USA) استعمال ڪندي ڪيا ويا. مطالعي دوران گڏ ڪيل ڊيٽا کي اوسط ± معياري انحراف (مطلب ± SD) جي طور تي ظاهر ڪيو ويو ۽ ٻن گروپن جي وچ ۾ فرق کي طئي ڪرڻ لاءِ ويرينس جي هڪ طرفي بار بار ماپن جي تجزيو (ANOVA) استعمال ڪندي تجزيو ڪيو ويو. P < 0.05 کي شمارياتي طور تي اهم سمجهيو ويو.
اهڙيءَ طرح، آٽولوگس اين پيز کي ورٽيبرل باڊي ۾ امپلانٽ ڪندي ۽ ميڪرو اناٽوميڪل مشاهدو، ايم آر آءِ تجزيو، هسٽولوجيڪل تشخيص ۽ ماليڪيولر حياتياتي تجزيو ڪندي ايم سي جي جانورن جي ماڊل جي قيام انساني ايم سي جي ميڪانيزم جي تشخيص ۽ سمجھڻ ۽ نئين علاج جي مداخلت کي ترقي ڪرڻ لاءِ هڪ اهم اوزار بڻجي سگهي ٿو.
هن مضمون جو حوالو ڪيئن ڏجي: هان، سي. وغيره. موڊڪ تبديلين جو هڪ جانورن جو ماڊل آٽولوگس نيوڪليس پلپوسس کي لمبر اسپائن جي سبڪونڊرل هڏن ۾ امپلانٽ ڪندي قائم ڪيو ويو. سائنس. ريپ. 6، 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
ويشوپٽ، ڊي.، زينيٽي، ايم.، هوڊلر، جي.، ۽ بوس، اين. لمبر اسپائن جي مقناطيسي گونج اميجنگ: ڊسڪ هرنيشن ۽ برقرار رکڻ، اعصاب جي جڙ جي دٻاءُ، اينڊ پليٽ جي غير معموليات، ۽ غير علامتي رضاکارن ۾ فيڪٽ جوائنٽ اوستيوآرٿرتس جي موجودگي. شرح. ريڊيالاجي 209، 661–666، doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
ڪجائر، پي.، ڪورسولم، ايل.، بينڊڪس، ٽي.، سورنسن، جي ايس، ۽ ليبوف-ايڊ، ڪي. موڊڪ تبديليون ۽ ڪلينڪل نتيجن سان انهن جو تعلق. يورپي اسپائن جرنل: يورپي اسپائن سوسائٽي، يورپي سوسائٽي آف اسپائنل ڊيفارمٽي، ۽ يورپي سوسائٽي فار سروائيڪل اسپائن ريسرچ 15، 1312–1319، doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006) جي سرڪاري اشاعت.
ڪوئسما، ايم.، وغيره. لمبر ورٽيبرل اينڊ پليٽس ۾ موڊڪ تبديليون: وچين عمر جي مرد مزدورن ۾ پٺي جي سور ۽ سائٽيڪا سان پکڙجڻ ۽ تعلق. اسپائن 32، 1116–1122، doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
ڊي روز، اي.، ڪريسل، ايڇ.، اسپرٽزر، ڪي.، ۽ ڊالنڪا، ايم. لمبر اسپائن جي خراب ٿيندڙ بيماري ۾ اينڊ پليٽ جي ويجهو هڏن جي ميرو ۾ تبديلين جو ايم آر آءِ. اي جي آر. آمريڪي جرنل آف ريڊيالاجي 149، 531–534، ڊي او آءِ: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
موڊڪ، ايم ٽي، اسٽينبرگ، پي ايم، راس، جي ايس، مساريڪ، ٽي جي، ۽ ڪارٽر، جي آر ڊيجنريٽو ڊسڪ بيماري: ايم آر آءِ سان ورٽيبرل ميرو تبديلين جو جائزو. ريڊيالاجي 166، 193–199، doi:10.1148/ريڊيالوجي.166.1.3336678 (1988).
موڊڪ، ايم ٽي، مساريڪ، ٽي جي، راس، جي ايس، ۽ ڪارٽر، جي آر ڊيجنريٽو ڊسڪ بيماري جي تصوير. ريڊيالاجي 168، 177-186، ڊي او آءِ: 10.1148/ريڊيالاجي.168.1.3289089 (1988).
جينسن، ٽي ايس، وغيره. عام آبادي ۾ نيوورٽيبرل اينڊ پليٽ (موڊڪ) سگنل تبديلين جي اڳڪٿي ڪندڙ. يورپي اسپائن جرنل: يورپي اسپائن سوسائٽي جي سرڪاري اشاعت، يورپي سوسائٽي آف اسپائنل ڊيفارمٽي، ۽ يورپي سوسائٽي فار سروائيڪل اسپائن ريسرچ، ڊويزن 19، 129-135، doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
البرٽ، ايڇ بي ۽ مينش، ڪي. لمبر ڊسڪ هرنائيشن کان پوءِ موڊڪ تبديليون. يورپي اسپائن جرنل: يورپي اسپائن سوسائٽي جي سرڪاري اشاعت، يورپي سوسائٽي آف اسپائنل ڊيفارمٽي ۽ يورپي سوسائٽي فار سروائيڪل اسپائن ريسرچ 16، 977-982، doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
ڪيرٽولا، ايل.، لووما، ڪي.، ويهماس، ٽي.، گرونبلڊ، ايم.، ۽ ڪاپا، اي. موڊڪ ٽائپ I تبديليون تيزي سان ترقي ڪندڙ ڊيفارميشنل ڊسڪ ڊيجنريشن جي اڳڪٿي ڪري سگهن ٿيون: هڪ 1 سالن جو امڪاني مطالعو. يورپي اسپائن جرنل 21، 1135–1142، doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
هو، زي جي، زاؤ، ايف ڊي، فينگ، ايڪس ڪيو ۽ فين، ايس ڊبليو موڊڪ تبديليون: ممڪن سبب ۽ لمبر ڊسڪ جي خراب ٿيڻ ۾ حصو. طبي مفروضا 73، 930-932، doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
ڪروڪ، ايڇ وي اندروني ڊسڪ ڦاٽڻ. 50 سالن کان وڌيڪ عرصي ۾ ڊسڪ جي پروليپس جا مسئلا. اسپائن (فيلا پا 1976) 11، 650–653 (1986).